簡要描述：耐藥性是一種因ATP結(jié)合盒式（ATP Binding Cassette，ABC）膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族上調(diào)介導(dǎo)所產(chǎn)生的現(xiàn)象。ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的過度表達(dá)了加速有毒物質(zhì)從細(xì)胞中的去除，例如hual劑從腫瘤細(xì)胞中排出，或抗生素從耐藥菌株中排出。Enzo的EFLUXX-ID® 多藥耐藥性檢測試劑盒可實(shí)現(xiàn)同時對三種臨床相關(guān)的 ABC 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的功能檢測：包括MDR1（p-糖蛋白）、MRP1/2 和 BCRP。
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EFLUXX-ID® multidrug resistance assay kit
多藥耐藥性檢測試劑盒——監(jiān)測三種ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白
簡單免洗檢測，可同時監(jiān)測3種耐藥性相關(guān)的ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白
耐藥性是一種因ATP結(jié)合盒式（ATP Binding Cassette，ABC）膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族上調(diào)介導(dǎo)所產(chǎn)生的現(xiàn)象。
ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的過度表達(dá)了加速有毒物質(zhì)從細(xì)胞中的去除，例如hualiao劑從腫瘤細(xì)胞中排出，或抗生素從耐藥菌株中排出。
Enzo的EFLUXX-ID® 多藥耐藥性檢測試劑盒可實(shí)現(xiàn)同時對三種臨床相關(guān)的 ABC 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的功能檢測：包括MDR1（p-糖蛋白）、MRP1/2 和 BCRP。
◆特點(diǎn)
● 簡單免洗的操作步驟，結(jié)果可在1小時內(nèi)獲得
● 可檢測與3種ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（MDR1（p-糖蛋白）、MRP1/2和BCRP）活性相關(guān)的耐藥性
● 通過單一專用染料可定量檢測活細(xì)胞中的多藥耐藥性（MDR）活性，并以MDR 活性因子（MAF）表征
● 試劑盒內(nèi)含有三種已知的MDR1（p-糖蛋白）、MRP1/2和BCRP蛋白特異性抑制劑
● 可檢測Calcein AM染料無法檢測的BCRP蛋白活性
● 有綠色、金色兩種熒光染料可供選擇
● 兩種染料均可與表達(dá)GFP的細(xì)胞系或其他CELLESTIAL® 染料同時使用
◆作用機(jī)制
EFLUXX-ID®使用了一種疏水性非熒光化合物，這種化合物容易穿透細(xì)胞膜，經(jīng)細(xì)胞內(nèi)酯酶水解成親水性熒光染料。除非EFLUXX-ID® 染料被泵出至細(xì)胞外，否則酯酶裂解的染料會一直存在于細(xì)胞內(nèi)。因此，表現(xiàn)出耐藥性的細(xì)胞將染料主動運(yùn)輸泵出胞外，會出現(xiàn)熒光減弱的現(xiàn)象。EFLUXX-ID® 檢測是目前少有可同時監(jiān)測三種主要的ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白并能夠分析單泵活性的試劑盒。
熒光團(tuán) | 兼容的EFLUXX-ID® 試劑 |
Cy 3 & Cy 5的偶聯(lián)物、Pl、7-AAD、APC、Texas Red、 RFP、YFP、TAMRA、UV和Violet 染料 | EFLUXX-ID® 綠色熒光染料 |
GFP/eGFP、RFP、PI、7-AAD、APC、Cy 5的偶聯(lián)物、 Rhodamine 123、Texas Red、UV和Violet 染料 | EFLUXX-ID® 金色熒光染料 |
表1：EFLUXX-ID® 多藥耐藥性染料與其他熒光染料的兼容性
圖1：對三種主要ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的活性進(jìn)行檢測。使用EFLUXX -ID Green（上）、Gold（中）或Calcein AM（下）染料，通過流式細(xì)胞術(shù)評估CHO K1細(xì)胞中ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的活性。與未處理的細(xì)胞相比，用ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白特異性抑制劑（圖中陰影部分）處理可誘導(dǎo)染料保留在細(xì)胞內(nèi)（圖中實(shí)線部分）。平均熒光強(qiáng)度（MFI）的差異表明了對應(yīng)蛋白的活性，在圖中通過多藥耐藥性活性因子值（MAF）進(jìn)行表征。更高的MAF值表明EFLUXX-ID染料對抑制劑有著良好的特異性。而Calcein AM染料的低MAF值表明其（常用的MDR檢測探針）無法檢測BCRP活性。
圖2：使用EFLUXX-ID® Green和EFLUXX-ID® Gold染料在CHO K1細(xì)胞中評估已知抑制劑對ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性的結(jié)果分析。將細(xì)胞與試劑盒中含有的MDR普通抑制劑（左一）、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白特異性抑制劑在37°C下孵育5 min。隨后在37°C下用指定的染料染色細(xì)胞30 min，并立即利用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行分析。所用抑制劑：5 µM環(huán)胞霉素 A（MDR普通抑制劑）、20 µM維拉帕米（P-gp特異性抑制劑）、0.05 mM MK-571（MRP特異性抑制劑）、0.05 mM新生霉素（BCRP特異性抑制劑）。
圖3：EFLUXX-ID® Green 490/514 nm ex/em和Gold 530/570 nm ex/em 試劑的光譜特性可與其他常見的熒光染料進(jìn)行多重檢測。
◆產(chǎn)品詳情
應(yīng)用 | 流式細(xì)胞術(shù)，熒光顯微鏡 |
應(yīng)用說明 | EFLUXX-ID® 多藥耐藥性檢測試劑盒可對活細(xì)胞（懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞）中的耐藥表型進(jìn)行檢測和分析。 |
品質(zhì)baozheng | 每批次EFLUXX-ID® Gold耐藥檢測試劑盒的樣品試劑盒均已按照操作手冊中的步驟，對第5代和第20代間的 CHO K1細(xì)胞系進(jìn)行染色。獲得的結(jié)果如下： 1. 維拉帕米介導(dǎo)的抑制后MAF>80 2. MK-571介導(dǎo)的抑制后MAF>60 3. 新生霉素介導(dǎo)的抑制后MAF>40 |
包裝 | 100 assays（流式細(xì)胞術(shù)） |
使用/穩(wěn)定性 | 自交貨后，試劑盒組分在適當(dāng)?shù)膬Υ鏃l件下可穩(wěn)定保存一年。 |
儲存條件 | 避光。避免反復(fù)凍融。 |
運(yùn)輸條件 | 藍(lán)冰運(yùn)輸 |
短期儲存 | -20°C |
長期儲存 | -80°C |
組分 | 2 瓶，EFLUXX-ID® Gold或EFLUXX-ID® Green檢測試劑 300 nmoles，MDR1 抑制劑（維拉帕米） 750 nmoles，MRP 抑制劑（MK-571） 1.5 µmoles，BCRP 抑制劑（新生霉素） 500 µL，碘化丙啶 |
科學(xué)背景 | 耐藥性是一種由跨膜ATP結(jié)合盒（ATP Binding Cassette ，簡稱ABC）轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族上調(diào)介導(dǎo)的現(xiàn)象。 ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的過表達(dá)加速了毒性劑從細(xì)胞中去除，例如hualiao劑從腫瘤細(xì)胞中流出，或抗生素從耐藥菌株中流出。 |
監(jiān)管狀態(tài) | RUO - 僅供研究用 |
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 | 備注 |
| ENZ-51029-K100 | EFLUXX-ID® Green multidrug resistance assay kit 藥檢測試劑盒（綠色熒光） | 1 Kit | - | - |
| ENZ-51030-K100 | EFLUXX-ID® Gold multidrug resistance assay kit EFLUXX-ID® 耐藥檢測試劑盒（金色熒光） | 1 Kit | - | - |
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