簡要描述：CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 2.0 使用新型染料檢測自噬小泡和監(jiān)控活細胞自噬流，選擇性標記積累的自噬小泡。染料已通過優(yōu)化，不染溶酶體，在自噬前體、自噬體和自噬溶酶體里呈現(xiàn)出明 亮的熒光。該試劑盒提供了一種無需細胞轉染，可以在活細胞中監(jiān)控細胞自噬的快速定量方法。
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CYTO-ID® 自噬檢測試劑盒 2.0
CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 2.0 使用新型染料檢測自噬小泡和監(jiān)控活細胞自噬流，選擇性標記積累的自噬小泡。染料已通過優(yōu)化，不染溶酶體，在自噬前體、自噬體和自噬溶酶體里呈現(xiàn)出明 亮的熒光。該試劑盒提供了一種無需細胞轉染，可以在活細胞中監(jiān)控細胞自噬的快速定量方法。
◆特點
● 更明亮，更耐光，特異性染色自噬小泡
● 無需轉染及轉染效率驗證
● 快速量化原生異質性細胞群中的自噬
● 不染溶酶體，減少其他染料的背景干擾
● 便于高通量篩選自噬激活劑和抑制劑
◆原理
該產(chǎn)品所用探針是陽離子兩親性示蹤劑（CAT）染料，以類似誘導磷脂藥物的方式迅速進入到細胞中。染料的功能基團能夠選擇性標記與自噬通路相關的小泡，而不會在溶酶體中聚集。
胞內物質被擴大的膜囊包裹，吞噬泡形成雙層膜囊泡，成為自噬體。自噬體外膜隨后與溶酶體融合，和內部物質被自噬性溶酶體降解。自噬的各種調節(jié)因子也被描繪于圖中。 |
自噬原理圖 |
◆應用
CYTO-ID® 綠色檢測試劑2（A組）在PBS確定的吸光度和熒光圖譜（499/548 nm）。 Hoechst33342（圖B）在1X測定緩沖液來確定的吸光度和熒光圖譜（350 /461 nm）。 | 的發(fā)放 |
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HeLa cells使用 CYTO-ID® Green Detection Reagent 2進行染色 (A) 培養(yǎng)基 (B) 在饑餓培養(yǎng)基 (EBSS)中添加40 µM Chloroquine培養(yǎng)4 h 。在含有Chloroquine 的EBSS培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細胞表現(xiàn)非常明亮的綠色熒光信號和點狀結構。 |
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運用流式細胞術分析Jurkat細胞的自噬 通過0.5 µM Rapamycin (RAP), 10 µM Chloroquine (CLQ)處理或不處理Jurkat細胞，或兩者一起處理20 h。CYTO-ID® Green Detection Reagent 2染色30 min后，洗脫，用流式細胞儀分析。直方圖疊加呈現(xiàn)結果。用RAP+CLQ處理細胞顯示熒光有升高。 |
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微孔板分析HepG2細胞的自噬 HepG2經(jīng)過DMSO（對照），0.5 μM Rapamycin (Rap), 10 µM Chloroquine (CLQ),或0.5 µM Rap 和10 µM CLQ同時培養(yǎng)20 h。細胞經(jīng)過Hoechst 33342染色進行細胞數(shù)目標準化。Rap 和CLQ同時處理細胞顯示自噬作用上升。 |
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| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 | 備注 |
| ENZ-KIT175-0200 | Cyto-ID® Autophagy detection kit 2.0 CYTO-ID®自噬檢測試劑盒2.0 | 200 tests | － | - |
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