切向流過濾法（TFF）作為一種高效的方法被用于細(xì)胞外囊泡（EV）濃縮和緩沖液置換。TFF通過將樣品與濾膜平行流動(dòng)來(lái)防止樣品在濾膜上堆積，盡可能地減少樣品損失。另外，EV等易吸附的樣品由于膜吸附和過濾操作中的物理應(yīng)力，回收率可能會(huì)降低。

EV-Save™ 細(xì)胞外囊泡保存穩(wěn)定劑（TFF用）旨在通過減輕TFF處理過程中的物理應(yīng)力以及膜的吸附來(lái)提高EV回收率。使用本產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)高效、穩(wěn)定的EV回收。

◆特點(diǎn)

●　抑制使用TFF進(jìn)行EV純化、濃縮和緩沖液置換過程中的EV損傷和EV對(duì)濾膜的吸附

●　操作簡(jiǎn)便，僅需向樣品添加本產(chǎn)品和平衡緩沖液

●　本產(chǎn)品可防止因吸附于試管而導(dǎo)致的EV損失，并防止凍融損傷，過濾后(TFF)的EV溶液可以直接保存。

   （注：僅在緩沖液交換過程中添加本產(chǎn)品才能達(dá)到此效果）

◆推薦樣品

●　純化的EV

●　細(xì)胞培養(yǎng)上清

在血清、血漿和干擾物質(zhì)含量高的樣品中，抗吸附效果可能會(huì)降低

◆推薦TFF模塊

MicroKros mPES 100 kDa (Repligen，廠家編號(hào)：C02-E100-05-N)

已確認(rèn)可使用以下模塊：

●　Pellicon XL UF Mod Biomax 100 kD 0.005m2 (Millipore)

●　Single-Use Discover 12" 100 kD 0.5 mm (Sartorius)

請(qǐng)注意，以下模塊無(wú)法使用：

●　Minimate TFF Capsules with Omega Membrane - 100K (Cytiva)

●　TFF-Easy - tangential flow filtration EV concentrator (HansaBio)

◆數(shù)據(jù)

性能數(shù)據(jù)

▼提高緩沖液置換過程中純化的 EV 的回收率

使用MassivEV™ EV Purification Column PS（產(chǎn)品編號(hào)：131-19491）從骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞（BMMSC）和脂肪組織來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞（ADMSC）的細(xì)胞培養(yǎng)上清中純化EV。然后，使用Repligen的TFF系統(tǒng)，更換添加了本產(chǎn)品1/100量的HBS 緩沖液進(jìn)行緩沖液交換。使用PS Capture™ 外泌體ELISA試劑盒（鏈霉親和素HRP）（產(chǎn)品編號(hào)：298-80601，檢測(cè)抗體使用抗CD63或抗CD81抗體），評(píng)估緩沖液置換后的EV回收率。，EV粒子粒徑分布則使用Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)進(jìn)行檢測(cè)。

（1）ELISA

【結(jié)果】

通過添加本產(chǎn)品，可以觀察到基于TFF置換緩沖液中EV的回收率升高。

（2）NTA

【結(jié)果】

添加本產(chǎn)品后，純化EV粒子粒徑分布并未觀察到明顯變化。

▼提高基于TFF從細(xì)胞培養(yǎng)上清中純化EV的回收率

使用TFF將細(xì)胞培養(yǎng)上清濃縮20倍，然后用100倍的緩沖液進(jìn)行置換。將本品以1/100的量添加至細(xì)胞培養(yǎng)上清液和置換緩沖液中。使用CD63和CD81的ELISA試劑盒檢測(cè)EV的回收率，使用Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)檢測(cè)EV粒子粒徑分布。

(1) ELISA

【結(jié)果】

通過添加本產(chǎn)品，可以觀察到從細(xì)胞上清中純化EV的回收率有所提升。

(2) NTA

【結(jié)果】

添加本產(chǎn)品后， EV的粒子粒徑分布并未觀察到明顯變化。

▼純化的EV吸附抑制和冷凍保護(hù)效果

（1）吸附抑制效果

分別將EV-Save™ 細(xì)胞外囊泡保存穩(wěn)定劑（產(chǎn)品編號(hào)：058-09261，下文寫作“常規(guī)產(chǎn)品"）和EV-Save™ 細(xì)胞外囊泡保存穩(wěn)定劑（TFF用）（下文寫作“本產(chǎn)品"）以1/100的量添加至純化的EV溶液中。之后轉(zhuǎn)移至微管，保存48小時(shí)。使用CD63和CD81的ELISA試劑盒檢測(cè)EV的含量。

（2）冷凍保護(hù)效果

使用TFF，從骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞（BMMSC）的培養(yǎng)上清中純化EV。將本產(chǎn)品以1/100的量添加至純化的EV溶液中，然后進(jìn)行3次凍融（從-20℃至室溫）。使用CD63和CD81的ELISA試劑盒檢測(cè)凍融前后的EV含量。

【結(jié)果】

本產(chǎn)品具有吸附抑制效果和冷凍保護(hù)效果，是EV保存的理想選擇。

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