EV-Up™ 間充質(zhì)干細(xì)胞專用外泌體生產(chǎn)用培養(yǎng)基是一種間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）專用的外泌體（EVs）生產(chǎn)培養(yǎng)基。只要將EV-Up™ 間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體生產(chǎn)用添加劑，無動(dòng)物源成分添加至EV-Up™ 間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體生產(chǎn)用基礎(chǔ)培養(yǎng)基，無動(dòng)物源成分中配成培養(yǎng)基即可使用。本品不含血清及動(dòng)物源成分， 適用于多種組織來源的MSCs的培養(yǎng)。

◆特點(diǎn)

●　比血清培養(yǎng)基的外泌體分泌量高

●　培養(yǎng)的外泌體活性高

●　維持MSC的高存活率

◆適用細(xì)胞

適用于多種組織來源的MSC

細(xì)胞種類

骨髓來源的MSC，脂肪來源的MSC，臍帶基質(zhì)來源的MSC等

◆使用方法

*1：往EV-Up™ 間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體生產(chǎn)用基礎(chǔ)培養(yǎng)基，無動(dòng)物源成分（產(chǎn)品編號(hào)：053-09451）中添加了EV-Up™ 間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體生產(chǎn)用添

*1：加劑，無動(dòng)物源成分（產(chǎn)品編號(hào)：298-84001）即為EV-Up™ 培養(yǎng)基

6孔板培養(yǎng)

1. 將各種間充質(zhì)干細(xì)胞以5×10³的密度來鋪板，然后用增殖培養(yǎng)基（血清培養(yǎng)基或無血清培養(yǎng)基）培養(yǎng)至80-90%匯合。

2. 去除增殖培養(yǎng)基后加入4 mL EV-UP™培養(yǎng)基。培養(yǎng)3-5日。

3. 回收培養(yǎng)上清，2,000×g離心20分鐘，用干凈試管收集離心后的上清液，避免吸入沉淀。

※　可在培養(yǎng)上清中添加1/100的EV-Save™ 細(xì)胞外囊泡吸附抑制劑來抑制試管或吸頭等對(duì)EV的吸附。

4. 用MagCapture™ 外泌體提取試劑盒PS提取培養(yǎng)上清中的外泌體。

◆應(yīng)用數(shù)據(jù)

外泌體粒子數(shù)

利用PS親和法^*1從各種培養(yǎng)基的培養(yǎng)上清液中提取外泌體，使用NanoSight的Nano Tracking Analysis技術(shù)對(duì)外泌體的粒子數(shù)進(jìn)行分析。

*1：在金屬離子的存在下，結(jié)合分子通過磷脂酰si氨酸（PS）捕獲細(xì)胞外囊泡后，再使用螯合劑洗脫的方法。

*1：使用MagCapture™外泌體提取試劑盒PS時(shí)，可以通過本方法進(jìn)行外泌體提取。

*2：Exosome-Depleted FBS

FUJIFILM Wako研發(fā)的EV-Up™ 培養(yǎng)基，在培養(yǎng)MSC時(shí)，釋放的外泌體粒子數(shù)是D-MEM+10% EV depleted FBS培養(yǎng)的2.6倍左右。另外，F(xiàn)UJIFILM Wako的EV-Up™ 培養(yǎng)基與血清培養(yǎng)基相比，可以分泌更多的EV。

抗纖維化活性

用TGFβ刺激培養(yǎng)人胎肺成纖維細(xì)胞（TIG3細(xì)胞），用PS親和法從不同培養(yǎng)基的培養(yǎng)上清中提取EV，取5×10⁷ particles/mL提取出的EV，用RT-PCR對(duì)纖維化標(biāo)記物（Collagen III，αSMA）的基因表達(dá)水平進(jìn)行定量，以比較抗纖維化活性。

使用FUJIFILM Wako研發(fā)的EV-Up™ 培養(yǎng)基的EV，強(qiáng)力抑制了由TGFβ引起的纖維化相關(guān)基因的表達(dá)。由此可見，F(xiàn)UJIFILM Wako的EV-Up™ 培養(yǎng)基能培養(yǎng)出的外泌體活性更高。

細(xì)胞存活率

將在血清培養(yǎng)基中擴(kuò)增培養(yǎng)的人骨髓來源的MSC用不同培養(yǎng)基培養(yǎng)5天，然后檢測(cè)產(chǎn)生外泌體后的細(xì)胞存活率。

FUJIFILM Wako 的EV-Up™ 培養(yǎng)基培養(yǎng)的MSC與D-MEM+10% EV-depleted FBS相比，具有同樣高的細(xì)胞存活率。

外泌體標(biāo)志物蛋白表達(dá)

用PS親和法從培養(yǎng)上清液中提取外泌體，并通過ELISA檢測(cè)標(biāo)記蛋白CD9、CD63和CD81的表達(dá)。

FUJIFILM Wako的EV-Up™ 培養(yǎng)基與其他血清培養(yǎng)基相比，不同外泌體標(biāo)記分子的表達(dá)更好。

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