LDH-細(xì)胞毒性檢測(cè)Wako

LDH-Cytotoxic Test Wako

◆背景

　　在日本每年在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中死亡的小鼠和大鼠達(dá)850萬只。其中以兔子眼睛作為藥品和化妝品檢測(cè)的樣本，利用德萊茲法觀察角膜和結(jié)膜的變化檢測(cè)毒性·刺激性的實(shí)驗(yàn)，是非常殘忍的。

　　因此，開發(fā)了在in vitro條件下的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)代替?zhèn)鹘y(tǒng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。此方法可檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞的毒性和細(xì)胞增值能力，不僅可測(cè)定因試劑破壞細(xì)胞而流出的酶量，還可以使色素滲入到活細(xì)胞中。比實(shí)驗(yàn)動(dòng)物法實(shí)惠且節(jié)省操作，可客觀地測(cè)定其毒性。

　　本產(chǎn)品是使用培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)各種試劑的毒性進(jìn)行簡(jiǎn)便測(cè)定的試劑盒。

　　可以直接測(cè)定細(xì)胞膜受到試劑影響而死亡的細(xì)胞中的游離LDH（乳酸脫氫酶），靈敏性高。

◆優(yōu)點(diǎn)

●　可用于吸附細(xì)胞·浮游細(xì)胞

●　使用酶測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定，可以對(duì)細(xì)胞毒性進(jìn)行精確的定量測(cè)定

●　通過調(diào)節(jié)樣品處理時(shí)間和顯色反應(yīng)時(shí)間可以調(diào)節(jié)靈敏度

●　使用吸光全自動(dòng)定量繪圖酶標(biāo)儀可以對(duì)多數(shù)樣品進(jìn)行測(cè)定

●　測(cè)定波長(zhǎng)：吸光560 nm

◆測(cè)定原理

　　在LDH的作用下乳酸會(huì)被丙酮酸氧化，而輔酶會(huì)被NADH還原。樣品中根據(jù)LDH活性按比例生成的NADH會(huì)在心肌黃酶的作用下會(huì)將硝基藍(lán)四氮唑還原，生成藍(lán)紫色的雙蟻酯。在560 nm（±10 nm）下測(cè)定這個(gè)顯色液的吸光度。

◆試劑盒構(gòu)成

顯色試劑 硝基藍(lán)四氮唑還原

心肌黃酶，NAD（3.7mg/vial）——————————————5 mL用×10支

緩沖液 DL-乳酸鋰（50mg/mL）——————————————————55 mL×11支

反應(yīng)停止液 鹽酸（1mol/L）————————————————————55 mL×11支

96孔微量滴定板—————————————————————————10塊（未滅菌）

◆使用方法

實(shí)驗(yàn)步驟

96孔板（滅菌）

↓→添加細(xì)胞。37℃下過夜

↓→PBS清洗

↓→添加檢測(cè)物。37℃，15分鐘

↓→離心分離

上清液

◆用途

　　通過LDH法檢測(cè)各種試劑毒性的試劑盒。